Keine Ahnung, es ist schwer, dir zu helfen, ohne es reproduzieren zu können 
Mein Mosquitto hat sich wie bei euch auf Version 2.0.16 aktualisiert und alles läuft.
Funktioniert es, wenn du dich manuell mit Mosquitto verbindest? (Zum Beispiel mit MQTT X)
Wenn du Gladys einzeln neu startest, verbindet sich Gladys dann wieder?
Wenn du in Node-RED gehst, siehst du, ob Node-RED verbunden ist oder nicht?
Wenn du in Node-RED ein neues „Szenario“ erstellst oder eine MQTT-Nachricht sendest, wird sie dann gesendet oder nicht?
Kein Geheimnis, meiner Meinung nach musst du jeden Teil der Kette testen, um herauszufinden, wo es hakt 
Zögere nicht, ein anderes Thema dafür zu erstellen, es ist kompliziert, wenn alles vermischt ist, deine Probleme zu verstehen.