Aucune idée, c’est dur de t’aider sans arriver à reproduire 
Mon mosquitto s’est mis à jour comme vous (2.0.16) et tout roule.
Est-ce que si tu essaie de te connecter manuellement à Mosquitto, ça marche ? (Avec MQTT X par exemple)
Si tu redémarre individuellement Gladys, est-ce que Gladys se reconnecte ?
Si tu vas dans Node-RED, tu vois que Node-RED est connecté ou pas ?
Si tu fais un nouveau « scénario » dans Node-RED ou tu envoie un message MQTT, il part ou pas ?
Pas de secret, à mon avis il faut tester chaque partie de la chaine pour trouver là ou ça coince 
N’hésite pas à créer un autre sujet pour ça, c’est compliqué quand tout est mélangé de comprendre tes problèmes.